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做標準曲線需要注意的問題

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目前國際上最流行的免疫檢測擬合方式四參數邏輯擬",用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系,從而進一步比較正確的獲得樣品中待測物質的濃度值。

???其實,在一個長的區間內Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是的。事實上不僅ELISA,其它很多生物學反應都S 線,也都可以Logistic曲線擬合。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。如果用來定量S形曲線的中間段(較陡處)是比較好的,而兩端的 坦部分計算誤差會大,有時甚至會很大。

做標準曲線需要注意:

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般7個點,但至少要保證5個點。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系R至少要大0.98,對于有些實驗,至少0.99甚至0.999


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2020年4月3日 11:59
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